SC∕T 7241-2020 鲍脓疱病诊断规程(水产)
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ID： |
D726D351DE4149C690E59C11499837C2 |
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文件大小(MB)： |
0.46 |
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页数： |
14 |
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文件格式： |
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日期： |
2021-12-23 |
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ICS 65.020.30,B 41 ←:才[:,中华人民共和国水产行业标准,SC/T 7241 一2020,鲍腺癌病诊断规程,Code of diagnosis for abalone pustule disease,2020-08-26 发布2021-01-01 实施,λ\ 中华人民共和国农业农村部发布,SC/T 7241-2020,I,SC/T 7241- 2020,鲍腺癌病诊断规程,范围,本标准给出了鲍版痕病(a ba l one pustule d i sease) 的术语和l定义、缩略语、试剂和材料、器材和设备、l临,床症状与表现，规定了采样、组织病理检测、PCR 检测l及综合判定,本标准适用工蛐盹瞄睛曲宿仨醋晶,2,下列λ忏λ',凡是不注日期的引,3,4,5,SC/ T 7011,SC/ T 7205.,下列,bp,DAFA,DNA,dNTPs,EDTA,PCR ,Tαq 酶,TE,Tris,Tris 三委主,试剂和材料,5 1 除非另有说明，标准,5 2 无水乙醇.,5.3 TE 缓冲液见附录A 中的人10,5. 4 抽提缓冲液见A. 2 0,5. 5 蛋白酶K 见A. 30,5.6 10 mo l/ L 乙酸镀见A. 40,5 7 平衡盼,5. 8 盼/氯仿/异戊薛(25 ' 24 ' 1) ,5 9 氯仿/异戊醇(24 : 1),5. 10 1 X 电泳缓冲液见A.5 0,5. 11 70% 乙蹲见A . 6 ,5. 12 di'ITPs(各2. 5 mmol/ L) : 生化试剂，含d?P 、dTTP、dGTP、d口?各2. 5 mmol/ L 的混合物， - 200C,SC/T 7241 - 2020,保存，用于PCR o,5. 13 10 X PCR 缓冲液生化试剂，无Mg2 + ， 随Taq DNA 聚合酶提供， 一20 0C 保存,5. 14 MgCl, (25 mmol/U 生化试剂， - 20 0C保存,5. 15 T叫， DNA 聚合酶(5 U/J.lU 田生化试剂， 一200C保存,5. 16 正向引物VFto xR-F (1 0μmo l/ U ， 5' -GACCAGGGCTTTGAGGTGGACGAC-3' ， - 20 0C保存,5. 17 反向引物VFto xR-R (1 0μmo l/ U , 5'-AGGATACGGCACT1‘GAGTAAGACTC-3' , - 20 0C保存,5. 18 PCR 检测阳性对照为已知感染河流弧菌且PCR 结果显示阳性的鲍组织样品， 一70 0C保存,5. 19 PCR 检测阴性对照为己知未感染河流弧菌且PCR 结果显示阴性的鲍组织样品， 一70 0C保存,5 20 PCR 检测空白对照以灭菌双蒸水作模板,5.21 琼脂糖,5. 22 DNA 分子量标准,5. 23 筛绢(600 目)过滤海水,5. 24 DAFA 固定液见A.7 ,5. 25 苏木精染色液见A. 8 0,5. 26 1 %伊红储存液见A.9 ,5. 27 1 %焰红储存液见A. lO o,5 . 28 伊红焰红染色液见A. ll o,5. 29 95% 乙E事,5.30 85% 乙醇见A. 1 2 0,5 31 80% 乙醇见A. 1 3 0,5. 32 75% 乙醇见A.1 4 ,5. 33 50% 乙醇见A . 15 0,5. 34 二甲苯,5. 35 石蜡(熔点520C~540C) ,5. 36 中性树胶,6 器材和设备,6 1 石蜡切片机,6 2 组织脱水机,6 3 包埋机,6. 4 染色机,6. 5 展片水浴锅,6. 6 恒温箱,6. 7 平板烘片机,6. 8 显微镜,6.9 PCR 仪,6. 10 电泳仪,6. 11 水平电泳糟,6. 12 紫外观察仪或凝胶成像仪,6. 13 高速离心机,6. 14 微量移液器,2,SC/T 7241-2020,7 临床症状与表现,病鲍食欲降低，腹足上有单个或多个隆起的白色胶痕，温度到高时病情加重，版范破裂后流出大量自,色版汁并留下2 mm.-.5 mm 的创面。随着病程延长，足面肌肉出现不同程度的wt烂，鲍附着力下降或完,全不能附着、甚至死亡。参见附录B o,B 采样,8. 1 采样对象,皱纹盘鲍( Ha l iotis di scus ) 等易感品种， 参见附录B 。选择濒死或表现出第7 ?在中所描述临床症状的,个体,8 2 采样数量、方法和保存运输,应符合SC/T 7205. 1 -2 007 附录B 的要求.,8. 3 样品采集,样本采集前使用灭菌水冲洗腹足部位，取2 mm ~5 mm 厚鲍腹足组织，立即保存于DAFA 固定液,中，固定1 2 h ~24 h 后， 进行组织病理检测或转移到7 0% 乙醇中暂存;取3 0 mg~50 mg 腹足组织，立即进,行DN A 提取或暂时保存于2 0 0C 冰箱,9 组织病理检测,9. 1 脱水,将组织块置于脱水机中或依次浸入盛有不同浓度乙醇溶液的容然中，流程如下: 7 5% 乙醇(l h,45 min) →85% 乙醇(1 h 45 min)→8 5 % 乙醇(1 h 45 min)→95 % 乙醇(45 min) → 95 % 乙碎(4 5 min) →无,水乙醇(45 min )→无水乙醇( 4 5 min) 0,9. 2 透明,脱水后的组织块置于脱水机中或依次浸入盛有无水乙酶: 二甲苯(1:1)混合液和二甲苯溶液的容器,中，流程如下. 元水乙醇: 二甲苯(1 : 1) ( 25 min)→二甲苯( 20 min)→二甲苯……
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